为实现栀子油中重要活性物质藏红花酸的栀油中藏准确定量，选取超声辅助液液萃取和固相萃取2种前处理方法进行系统探讨，红花重点考察了溶油试剂、及其究料液比、法测萃取试剂种类、定研萃取试剂浓度、栀油中藏液液萃取时间、红花液液萃取温度以及液液萃取次数等因素。及其究
在2种前处理方法的法测最优条件下，超声辅助液液萃取获得的定研藏红花酸含量高于固相萃取，且超声辅助液液萃取操作简单、栀油中藏耗时短、红花能耗低。及其究因此，法测最优前处理条件确定为：超声辅助液液萃取，定研以N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶油试剂，料液比为0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇为萃取试剂，室温超声2 min，萃取1次，检测到的栀子油中藏红花酸含量的平均值为69.65 μg/g（RSD=4.45%）。
在此基础上，对菜籽油进行加标回收实验，平均加标回收率为86.61%（RSD=1.16%），体现了方法的可行性和稳定性。该实验建立的方法可用于栀子油中藏红花酸的HPLC快速、准确定量检测。
藏红花酸化学式为C20H24O4，属于类胡萝卜素。藏红花酸是珍贵的药用资源，在预防心血管疾病方面具有一定功效，通过增强脂质和胆固醇的排泄，防治高血脂和动脉粥样硬化。此外，藏红花酸还具有预防阿尔茨海默病、减少皮肤损伤、抗抑郁、保护肝脏、抗肿瘤等作用。
目前，大多将藏红花作为获取藏红花酸的来源，而藏红花价格昂贵，是意大利、土耳其、伊朗等地栽培的一种草本植物。栀子具有多种生物活性，是除藏红花以外，唯一含有藏红花酸的植物。藏红花在我国少有种植，而栀子相对便宜、适应性强、种植成活率高，是原产于我国的重要木本植物资源之一。
藏红花酸含量是栀子质量的重要评价指标之一。目前，关于栀子中藏红花酸含量的检测方法已有一些报道，如：张永利等采用酶解法将栀子果中的藏红花素转化为藏红花酸，并用紫外分光光度法进行检测。陈雁等采用HPLC法检测栀子果中的藏红花酸和藏红花素。栀子果具有20%～25%的可食用脂肪，可加工成栀子油，类似山茶油和橄榄油等产品，属于国家支持、倡导的大健康新型木本植物油。
CAI X等通过HPLC-DAD/ESI-MS发现栀子油中含有藏红花酸。食用油中的微量活性营养物质是评价食用油品质的重要指标。而藏红花酸作为一种栀子油特有的功能性成分，也许可以作为评价栀子油营养品质的重要参考指标。GB 509.149—2016《食品安全国家标准 食品中栀子黄的测定》中涉及到液体中藏红花酸的分析方法，将酱油等液体用甲醇溶解后直接进样检测，但该法并不适用于植物油。
由于植物油不能溶解在甲醇中，所以油料需先经过溶油试剂处理，再用有机溶剂萃取其中的藏红花酸。因此，如何有效溶油并高效提取、检测其中的藏红花酸是方法的重点所在，现阶段，植物油中藏红花酸的定量检测方法未见报道。
超声辅助液液萃取法是一种传统的样品分离技术。该方法无需多余仪器，耗时短、效率高，但对于样品的分离纯化可能不够完全。如：刘金铭等采用超声辅助液液萃取提取食品中的活性成分。
固相萃取法对于样品的净化效果更好，可以降低样品基质干扰，提高检测灵敏度，但固相萃取SPE小柱价格较高。如：陈坤等采用C18固相萃取柱对食用油净化，检测其中的乙基麦芽酚。
文章系统比较了2种前处理技术，筛选得到了栀子油中藏红花酸的最优提取方法，建立了栀子油中藏红花酸的HPLC快速、准确定量检测方法，为栀子中藏红花酸的研究奠定了方法学基础，对栀子健康功能油的开发及品质评价提供了重要工具。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
藏红花酸标准品（纯度≥98%）；Methyl Alcohol（HPLC级）、Acetonitrile（HPLC级）；乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）、石油醚、氯仿；正己烷、吡啶；CNWBOND Diol二醇基固相萃取SPE小柱；栀子油：浙江骄栀科技有限公司；原香菜籽油：金太阳粮油股份有限公司。
BAS224S分析天平，DS-2510DTH超声波清洗器，D-37520超速离心机，SHB-Ⅲ-A循环水式多用真空泵，Essentia LC-16岛津高效液相色谱仪。
1.2 实验方法
1.2.1 标准样品储备液的制备
藏红花酸标准品储备液的制备：准确称取0.60 mg（精确至0.1 mg）藏红花酸标准品，用吡啶溶解完全后，加入甲醇（色谱级）并转移到50 mL容量瓶中，混匀，定容，获得12 μg/mL的藏红花酸标准储备液。
1.2.2 HPLC色谱条件
色谱柱为反相柱子Kinetex 5u XB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，Phenomenex）。色谱条件参照GB 509.149—2016《食品安全国家标准 食品中栀子黄的测定》：流动相为乙酸-乙酸铵缓冲溶液（A）-乙腈（B）；洗脱梯度：0.0～1.0 min，20%B；1.10～8.0 min，20%～60%B；8.0～8.1 min，60%～70%B；8.10～13.0 min，70%～98%B；13.10～15.0 min，98%～20%B；15.10～20.0 min，20% B；流速为1.0 mL/min；进样量为10 μL；柱温为35 ℃。
1.2.3 超声辅助液液萃取
1.2.3.1 溶油试剂种类及料液比
称取0.5 g栀子油于烧杯中，分别加入5 mL正己烷、DMF、石油醚、氯仿溶油。待油液全部溶解后，加入10 mL 100%的甲醇，常温条件，立即超声2 min。超声后，经8000 r/min离心10 min，分层后吸取有机相，用甲醇定容到25 mL容量瓶中。分别取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，进行液相分析。选择好溶油试剂之后，再对料液比进行优化：即分别加入2.5、5、7.5、10、12.5 mL DMF。
1.2.3.2 萃取试剂种类及浓度
称取0.5 g栀子油于烧杯中，加入5 mL DMF，待油液全部溶解后，分别加入10 mL浓度100%的乙酸、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇，立即超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后吸取有机相，甲醇定容到25 mL的容量瓶中。分别取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，进行液相分析。选择好萃取试剂之后，再对萃取试剂浓度进行优化：即分别加入浓度70%、80%、90%、100%的甲醇。
1.2.3.3 温度及时间对提取栀子油中藏红花酸的影响
称取0.5 g栀子油于烧杯中，加入5 mL DMF，待油液全部溶解后，加入10 mL浓度100%的甲醇，保持时间2 min不变，分别在30、60、90 ℃条件下进行前处理，然后经8000 r/min离心10 min，分层后吸取有机相，甲醇定容到25 mL的容量瓶中。分别取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，进行液相分析。时间条件为：30 ℃时，分别在2、12、22、32 min条件下进行前处理。
1.2.3.4 萃取次数
确定溶油试剂、料液比、萃取试剂种类及浓度、超声温度和时间等因素后，对萃取次数进行优化：称取0.5 g栀子油于烧杯中，加入5 mL DMF，待油样全部溶解后，加入10 mL 100%的甲醇，立即超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后吸取有机相，甲醇定容到50 mL的容量瓶中，获得萃取1次的样品；称取0.5 g栀子油于烧杯中，加入5 mL DMF，待油样全部溶解后，加入10 mL 100%的甲醇，立即超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后吸取有机相到50 mL容量瓶中。
再次往离心后的油相中加入5 mL DMF，待油样全部溶解后，加入10 mL 100%的甲醇，立即超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后吸取第二次的有机相到放置于第一次有机相的50 mL的容量瓶中，并用甲醇定容。此为提取2次的样品。同理可得，提取3次的样品。分别取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，进行液相分析。
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